293t细胞为什么变圆 293t细胞容易飘怎么解决

活细胞荧光染色后细胞形态变圆是什么原因

不固定直接染色，细胞就会变圆，因为染色液的渗透压和细胞质不一样

293t细胞为什么变圆 293t细胞容易飘怎么解决

可以选择用CFSE染色后，铺板。过夜，等细胞重新贴壁后，再用PI染色，你应该是要看双染的效果，这个比较合适。用荧光显微镜观察的时候可以先观测拍照再固定，避免甲醇影响了细胞状态让它贴的不牢，或者不固定直接拍照，PI染色效果一个小时影响不大。

HEK-293T人体肾脏细胞系（STR鉴定）

HEK-293T细胞是293T（293tsA1609neo）细胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。细胞持续表达SV40抗原，该细胞常用于转染实验，转染效率较高。（转染一般以50%密度铺板，待细胞刚刚贴到皿壁上后（一般8-10小时），即可进行转染作）

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100 ，200 各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

293T细胞贴壁慢，抱团生长，我该怎么办

1.细胞单用Trypsin消化，消化下来的细胞容易成团并且吹打后也不容易成为单细胞，并且消化时间要掌握好，很容易漂起来；

2.用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution消化，感觉应该在用秒计的时间就消化下来，处理要迅速，我曾经弃Trypsin溶液后，就几乎看不到细胞了， 用丁香海豚 的0.05%的胰酶+0.01%的EDTA可能是一个比较好的办法；

3.贴壁我也感觉不是特别牢，一般传代后8～10小时贴壁。瓶子可能是一个问题，我用的是玻璃瓶，也没有另外包被，可能用多聚赖氨酸包被会长得更好。

293T细胞培养求助

如果，在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；

2）血清质量不好，反复冻融的结果；

3）配制培养基的PH值偏高，不宜细胞生长；

4）配制培养基的水质、容器不合格。

可应用离心、过滤的方法去除这些黑点。

细胞培养中如何防止黑点生成：

1） 掌握细胞传代的时机，细胞切勿生长过老；

2） 尽可能地减少血清冻融次数；

3） 培养基无需37℃水浴；

4） 培养基保持PH值7.0- 7.2；

5） 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。