土壤中分离放线菌的实验设计 土壤中放线菌的分离纯化实验

如何从土壤中分离出细菌，放线菌，霉菌，酵母

首先用灭菌水稀释土壤,充分摇匀,就可以用玻棒蘸取土壤溶液,在经过灭菌的特制培养基培养皿上划线,然后进行培养.一般我们培养细菌和酵母菌用LB培养基,青霉菌用PDA培养基,其他的没坐过不太清楚.等培养出来后挑出单一菌落进行继代培养,用显微镜观察是什么菌.

土壤中分离放线菌的实验设计 土壤中放线菌的分离纯化实验

土壤里的细菌习性别很大,生长条件要求也很不一样,有固氮菌,硅酸盐细菌,菌根菌,很多很多种,有很多种是很难在一般培养基中生长的,需要有特殊的环境,但也有很多种可以在普通的培养基上培养,生长比较快,可以培养出五彩斑斓的菌落.

对好氧菌培养相对容易一些,如果要培养厌氧菌条件特殊,需要加入特殊的品,或者采取深层培养或其他的厌氧条件.

土壤中微生物特别丰富,含有放线菌、真菌等,在培养过程中,可以使用选择性培养基,加入一些抑制其生长的品,尽可能消除其干扰.

跪求 土壤微生物的测定：涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤（详细）

1.营养琼脂培养基的配置，按照瓶上的说明书就行。倒平板

2.才取3土样，地表3CM下湿润土壤

3.无菌水溶解，震荡充分，可放点玻璃珠

4.作5到6个梯度的稀释

5.取几个稀释度的土壤液涂板，每个板加100UL

6.28℃或者37摄氏度培养，观察

7.有单菌落后挑出重复涂板几次直至菌种单一

8.分离不同菌用培养基不同，看楼上。。。

常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；28度恒温培养

常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；37度培养

常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等，37度恒温培养

配方在许多微生物实验教材的附表上都有

土壤放线菌的分离和纯化要注意哪些问题

（1）能分解尿素的细菌将尿素氧化成氨气，代谢类型为异氧需氧型．（2）尿素为碳源的培养基上，只有能分解尿素的菌才能以尿素作为氮源生长繁殖，不能分解尿素的菌因缺乏氮源无法生长繁殖，因此分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用尿素为碳源的培养基进行分离，分解尿素的菌在分解尿素时产生氨气，使酚红指示剂显红色，所以要加入酚红指示剂进行鉴别．（3）若取土样5g，应加入45ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液，样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落的数目，选用一定稀释范围的样品进行培养，取样稀释前，一定要将菌液摇匀以减少误；将103-107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用稀释涂布平板法将菌液用涂布器涂布到固体培养基上．（4）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有红色环带的菌落既是分解尿素的菌的菌落，估算样品中的活菌数时，往往选取菌落数在30 到300之间的平板，分析表格是数据可知，105和106的稀释度平板菌落数在这一范围．故答案应为：（1）异氧需氧型（2）尿素为氮源 酚红（3）45（4）摇均（震荡、混匀） 涂布器（玻璃刮刀） 稀释涂布（平板）法（5）红色环带 105或106

如何对土壤中细菌、放线菌及霉菌数量进行测定,要求设计实验方案!

【实验内容及步骤】

一、分离

1.\x05制备土壤悬液及系列稀释液

称取土壤1g,放入99mL无菌水的三角瓶中,振荡10min,即为稀释10－2的土壤悬液.另取装有无菌5支,用记号笔编上10－3、10－4、10－5、10－6 、10－7 .在每只中用无菌吸管加入4.5ml无菌水.取已稀释成10－2的土壤液,振荡后静止0.5min,用无菌吸管吸取0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水的中,并在内轻轻吹吸数次,使之充分混匀,即成10－3土壤稀释液.同法依次连续稀释至10-4、10-5、10-6、10-7土壤悬液.

2.\x05倒平板

将已经配制好的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、土豆培养基在电热炉上熔化.在无菌工作台的酒精灯旁,将培养基倒入培养皿中,加盖后轻轻摇动使其在培养基上均匀铺开,平置于桌面上,待其凝固后即为平板,注意保证无菌操作.

3.\x05涂布法分离各类微生物

将0.2ml菌悬液滴在平板表面位置,右手拿无菌涂布器平放在平板表面,将菌悬液先沿一条子线轻轻的来回推动,是之均匀分布,然后改变方向沿另一直线来回推动,平板边缘可改变方向用涂布器再涂布几次.

4.\x05培养（incubation）

28~30C,24~48hr

5.\x05观察记录结果、记数（counting plates）：细菌数量=数出的菌落数/稀释度.例如,10-5稀释度时菌落数为125个,则细菌数量=125/10-5=1.25107个/ml.

这个是大学的实验,用的方法是稀释涂平板计数.

《微生物问题》如何从土壤中分离微生物?（霉菌,细菌,放线菌等）

1.取以少许土壤（一地表以下10cm处为宜）与适量无菌水混匀备用

2.做浸出液的梯度稀释

3 .涂平板

4.划线分离

5.接平板,接斜面

6.检测

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涂布平板法实验器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制 牛肉膏 0.3g

蛋白胨 1g

氯化钠 0.5g

琼脂 2g

自来水 100mL

pH 7.0～7.2 灭菌 1.05kg/cm2，22min

配制具体步骤

1．称量

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称品时严防品混杂，一把牛角匙用于一种品，或称取一种品后，洗净、擦干，再称取另一品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化

在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。后补足所失的水分。

3．调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。

4．过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。很多都是不需要过滤的。

5．分装

按实验要求，可将配制的培养基分装入内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

(1)液体分装分装高度以高度的1/4左右为宜。

(2)固体分装分装，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。分装三角量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

(3)半固体分装一般以高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

6．加塞

培养基分装完毕后，在口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。

7．包扎

加塞后，将全部用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

8．灭菌

将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。

9．搁置斜面

将灭菌的培养基冷至50℃左右，将棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过总长的一半为宜。

10．无菌检查

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否。

1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。

2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）

3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。

四、实验方法

1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。

图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养

用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。

2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。

（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。

（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。