免疫组化特异性染色的表现有哪些 免疫组化染色的非特异性反应

免疫组化是利用抗原抗体结合的原理的一种检测方法，常用于病理检查，帮助明确肿瘤的来源，鉴别肿瘤的类型等。

免疫组化特异性染色的表现有哪些 免疫组化染色的非特异性反应

免疫组织化学染色是病理组织学染色中的一种特殊类型，它是利用免疫学和抗原、抗体反应的原理，在已知抗体上标记荧光或者可呈现颜色的化学物质，抗体作为探针检测待检测标本或者细胞标本中是否具有相应的目标抗原。这种方法可以检测出抗原的表达量，也可以观测到目的抗原的表达位置，蛋白质、核酸、多糖、病原体等，都可以通过这种抗原、抗体发生的免疫反应的分子得到相应的检验结果，从而达到获知肿瘤组织或者其他组织确诊的目的。特殊染色主要是根据染色的不同要求，对组织、器官以及部分特有的细胞结构，如纤维、细胞浆、细胞质中的有效成分进行有特殊性质的染色，无论是哪种染色其目的都是为临床诊断服务。【摘要】

做病理要做免疫组化和特殊染色是什么意思【提问】

免疫组织化学染色是病理组织学染色中的一种特殊类型，它是利用免疫学和抗原、抗体反应的原理，在已知抗体上标记荧光或者可呈现颜色的化学物质，抗体作为探针检测待检测标本或者细胞标本中是否具有相应的目标抗原。这种方法可以检测出抗原的表达量，也可以观测到目的抗原的表达位置，蛋白质、核酸、多糖、病原体等，都可以通过这种抗原、抗体发生的免疫反应的分子得到相应的检验结果，从而达到获知肿瘤组织或者其他组织确诊的目的。特殊染色主要是根据染色的不同要求，对组织、器官以及部分特有的细胞结构，如纤维、细胞浆、细胞质中的有效成分进行有特殊性质的染色，无论是哪种染色其目的都是为临床诊断服务。【回答】

免疫组化原理

免疫组化染色是用一抗与被检测组织中目的蛋白抗原结合，然后用HRP等标记的二抗与一抗进行结合，最后通过与DAB显色剂反应，进而确认所要检测蛋白抗原的定位、半定量等目的。

免疫组化更多的意义在于查看目的蛋白的定位。定量一般用western来实现。

免疫组化染色和HE染色的不同之处可能是HE染色比较粗略地辨认不同细胞形态学改变；而后者能够针对特异性细胞标志物来检测特异性细胞的改变（数量）、也可检测细胞内细胞因子的转位，组织中一些特异性蛋白的表达的量改变（通过图像分析系统分析颜色深浅、分布的面积等综合分析）。

通俗的讲，HE仅仅是看大体病理改变，比如组织坏死，比如炎性渗出。免疫组化，看你的目的蛋白的表达情况。

免疫组化和****HE****染色的对比

DAB和HE一样也是一种染色剂，HE染色相对简单，能分辨出细胞中的嗜酸嗜碱性物质；DAB染色全称应该叫做免疫组化DAB染色，经过一系列复杂的生化反应后，DAB(二氨基联苯胺)染色剂能将辣根过氧化物酶染成棕色。

常用的免疫组化染色方法:

组化用HRP的话，信号不够强。通常用生物素标记HRP来增强信号。

1、 ABC法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法）

ABC法是利用卵白素与生物素特有的高度亲和力特性，与生物素化二抗结合，形成抗原＋特异性抗体＋生物素化二抗＋卵白素＋生物素＋HRP复合物，最后DAB显色。

复合物配制：先将生物素与酶结合，形成生物素化HRP，以生物素化HRP与卵白素按一定比例混合，形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物。

2、 SP法（抗生物素蛋白链酶素-过氧化物酶复合物）

本身没有连接生物素，但有两个生物素亲和力极高的结合位点，可以与二抗上的生物素结合，敏感性高，复合物不需要使用前混合，更为简便。

3、 PAP法

4、 直接法

样本制备

免疫组化结果分析

免疫组化结果的判断原则：

1 、必须设阳性对照和阴性对照。

2 、 抗原表达必须在特定部位。

3 、 阴性结果不能视为抗原不表达。

免疫组化染色实验组与对照组结果分析表

从表可以看出只有6、7实验结果有意义。1-5均因对照组的结果已否定Ab的特异性或IHC技术操作存在错误等而使实验结果失去意义，必须重复实验或换用Ab。

染色失败的几种情况及原因:

1、 所染的全部切片均为阴性结果，包括阳性对照在内。

2、 所有切片均呈阳性反应。

3、 所有切片背景过深。

4、 阳性对照染色良好，检测的阳性标本呈阴性反应。

所有切片呈阳性反应，其原因:

1、 切片在染色过程中抗体过浓，或干片了。

2、 缓冲液配置中未加氯化纳和PH值不准确， 洗涤不彻底。

3、 使用已变色的呈色底物溶液，或呈色反 应时间过长。

4、 抗体温育的时间过长。

5、 H 2 O 2 浓度过高，呈色速度过快且粘附剂太厚。

所有切片背景过深，其原因:

1、 内源性过氧化酶没有完全阻断。

2、 切片或涂片过厚。

3、 漂洗不够。

4、 底物呈色反应过久。

5、 蛋白质封闭不够或所用血清溶血。

6 、使用全血清抗体稀释不够。

阳性对照染色良好，检测的阳性标本呈阴性反应。

最常见的原因:标本固定和处理不当。

注意事项：

1、 苏木素复染时间需要摸索，尤其要考虑阳性染色的位置。

2、 切片脱蜡和水化要充分；加反应液时要覆盖组织充分；每次加液前甩干洗涤液，但又防止干片。

3、 以下原因可能导致片子着色不均匀：

①脱蜡不充分。可以60℃烤20min，立即放入新鲜的二甲苯中。

②水化不全。应经常配制新鲜的梯度乙醇。

③抗体没混匀。用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂。④抗体孵育时，切片放倾斜。

⑤抗体孵育后PBS冲洗不充分。

⑥制片厚薄不均匀等问题。

⑦染片盒不平，切片倾斜。

4、 一抗的清洗:

1、单独冲洗，防止交叉反应造成污染。

2、温柔冲洗，防止切片的脱落，推荐用浸洗方式。

3、冲洗的时间要足够，才能彻底洗去 结合的物质。

5、 PBS的PH和离子强度的使用：

1、建议PH在7.4-7.6浓度是0.01 M。

2、中性及弱硷性条件（PH7-8）有利 于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利 于分解。

6、 拍照：

1、有条件的话应该立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。

是免疫组化。浅蓝色的应该是苏木精，就是常说的HE染色里的H。 免疫组化最后通常都要用苏木精衬染几秒到一分钟。苏木精是一种碱性染料，主要染细胞核（有时候也会染细胞间质），衬染的目的是让你看清细胞的轮廓，对染色结果做一个粗略的判断。

你贴的图分辨率太低，我不予置评。我来举个例子吧。下面这张图比较清楚，这是人肺癌组织的CD20染色。你看，大的蓝色点点是癌细胞的核，小一点的蓝色点点是浸润的免疫细胞的核；棕褐色的染色（CD20蛋白）集中于某些小蓝点周围。CD20蛋白是B细胞膜蛋白，所以这个染色比较成功，应该是特异性染色

。如果没有苏木精衬染，那就是一块白板上一堆小黑点，没法判断是不是特异性染色。

免疫组化染色影响因素

影响免疫组化染色质量的因素有很多，在实验中应注意组织的取材和固定，选择质量好的商品化抗体，恰当地选择和使用封闭和抗原修复手段，严格的技术操作和对照等。

1。假阴性反应可发生在：

1) 组织内待测抗原已被分解破坏，或抗原含量过低；

2) 抗原被遮盖，多由于醛类固定剂的使用，使组织中的大分子蛋白借醛键形成交联而遮盖待检抗原；

3) 抗体质量不佳或稀释度不当；

4) 技术操作失误等。

2．假阳性反应可发生在：

1) 抗体与非待检抗原发生交叉反应，在使用多克隆抗体时易出现；

2) 组织对抗体的非特异性吸附，特别是在有大片组织坏死或组织中有较多富于蛋白的液体时容易发生；

3) 内源性过氧化酶的作用，在脾脏、骨髓及一些炎性病变组织的染色中易出现；内源性碱性磷酸酶的作用，特别是肠黏膜上皮和肾近曲小管的刷状缘有高浓度的碱性磷酸酶，若处理不彻底，易出现假阳性结果；

4) 判断失误，将肿瘤组织中残留的正常组织的免疫组织化学阳性信号误认为是肿瘤的染色反应；

5) 当肿瘤浸润破坏正常组织时，使被破坏的正常细胞胞浆内的可溶性蛋白释放，后者被肿瘤细胞非特异吸附或吞噬，使瘤细胞出现该种抗原的阳性反应；⑥外源性和内源性色素的干扰。

免疫组化的指标都有哪些，选取这些指标的意义是什么

Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。

多数腺癌表达CEA

Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。

P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短

Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。

E-Ca，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。

PS2（雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。

CK18，低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。

CK19，分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应

Hep par 1,肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。

CK20，用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。

CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。

Villin 绒毛蛋白，正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。

乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其他villin免疫组化染色通常为阴性表达的肿瘤还有：如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。间皮瘤也经常为villin阴性表达，因此在一些情况下Villin还可以作为鉴别间皮瘤和腺癌使用抗体的一种。

但是也有一些非胃肠道来源的肿瘤可表达villin，如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小部分肺癌。也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。

肝癌的诊断 : Villin免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构，因此它也可能在表达部分肝癌的管状结构上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一种试剂，而且CD10 (CALLA)在表达肝癌的该结构上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10 (CALLA)在肝癌病例上的表达，相互之间并没有任何的冲突，因此如果怀疑肝癌的可能性，建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例的诊断。

Villin在神经内分泌肿瘤上的应用 : Villin在神经内分泌肿瘤的研究上也很有帮助。众所周知，类癌和胰腺的胰岛细胞肿瘤具有相相似的形态学特征，仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎是不可能的。Villin在这种情况下特别有用，因为据文献报道在85%的胃肠道类癌病例中有villin的表达，但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道。Villin在类癌上的表达通常为胞膜阳性。另外，有一些证据表明villin在胃和下消化道的小细胞癌上的表达率比在其他部位的小细胞癌上要高。如：肺、食道、膀胱或前列腺等。据文献报道，大约有40%的肺类癌病例villin阳性，在其他一些神经内分泌肿瘤上，如甲状腺髓样癌和少数的美克尔细胞瘤上也有villin的表达。

MRP1多药耐药相关蛋白1，影响化疗敏感性，和预后相关。

MDR 多药耐药基因

TS胸苷合成酶，是5-FU重要作用靶点，如果其高表达，阳性反映++以上，提示肿瘤细胞对5FU耐药。

Syn 突触素 神经组织标志 : S-100 神经组织标志，存在于神经组织，垂体、颈动脉体，肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织，常用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断。

NSE 主要用于神经内分泌肿瘤诊断

Chr,嗜铬素，肾上腺髓质含量很高，鉴别肾上腺髓质和皮质，用于神经内分泌肿瘤诊断。

CKH 高分子角蛋白，主要标记鳞状细胞肿瘤

CKL 低分之角蛋白，主要标记单层上皮、腺上皮

EMA 上皮膜抗原，糖蛋白，广泛分布各种上皮及其肿瘤

Vim 波形蛋白，间叶组织标志

P504 甲酰基辅酶A消旋酶检测诊断前列腺癌的敏感性为97％，特异性为100％。

AMACR的优点在于它是癌症特异性，只存在于癌症组织。Rubin称，AMACR亦可用作其他癌症的诊断标志物。对各种癌症细胞进行检查后发现，结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都过度表达AMACR，以结肠直肠癌和前列腺癌表达最高。

CD117 胃肠间质瘤

CD10 作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原，主要表达于未成熟淋巴细胞，在Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系统疾病的诊断中具有应用价值。近几年来发现该抗原在造血系统外的某些肿瘤中有表达，如子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤等。抗体在对肾细胞癌进行诊断和鉴别时有一定的参考价值。

SMA 平滑肌肌动蛋白，标记平滑肌

CD56 为神经细胞黏附分子，主要分布于大多数神经外胚层来源细胞，常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断，也是NK细胞瘤的重要标志，也标记小细胞肺癌

Des,结蛋白，广泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌细胞和肌上皮细胞，高分化高表达、低分化低表达。

MSA 肌特异性肌动蛋白，广泛分布于几乎所有肌型细胞中

CD68 存在于骨髓和各神经组织的巨噬细胞 用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、包括恶性纤维组织细胞瘤诊断（首选）。

CD34 表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞和某些神经组织细胞，多用于标记血管内皮细胞，血管源性肿瘤的诊断，GIST 80-90%.CD31也标记血管内皮。

NESTIN,神经干细胞中极为丰富

Ost 成骨素，为骨化细胞分泌。

AAT 抗胰蛋白酶 纤维组织细胞来源肿瘤 ACT抗糜蛋白酶

GFAP 胶质纤维酸性蛋白 神经组织标志，多用于星形胶质瘤诊断

Tg 甲状腺球蛋白，甲状腺癌TG阳性。

CT 降钙素 甲状腺髓样癌阳性。

PH 甲状旁腺素 甲状旁腺肿瘤阳性

TTF-I 甲状腺转录因子-1 :TTF-1表达于甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞中。在肺肿瘤研究中发现，大多数肺的小细胞癌、原发性和转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF-1阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTF-1阴性。在甲状腺乳头状腺癌中TTF-1亦阳性，而TTF在其它组织表达阴性。据此认为TTF-1可用来鉴别肺腺癌与鳞癌，并有助于与肺转移性腺癌的鉴别。

TTF-1在甲状腺及其肿瘤中的表达:TTF-1主要表达在甲状腺滤泡细胞中和甲状旁腺的主细胞中， TTF-1为甲状腺分化和甲状腺球蛋白分泌调节的基础物质，可促进甲状腺过氧化物酶、碘/钠的转运，TTF-1与血清TSH的活性有关，活性的TSH-R 可增强TTF-1的表达。TTF-1在良恶性甲状腺组织中表达不同，正常甲状腺和良性腺瘤表达多，甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少，未分化癌中不表达，TTF-1在恶性甲状腺病变中的表达强度随年龄增加而增强，而且病变存瘤期长，复发机率高。

TTF-1在肺癌中的表达:75%的肺非小细胞癌（NSCLCs)阳性表达，腺癌(ACs)明显高于鳞癌(SCC)，90%以上的原发性小细胞肺癌(SCLC)表达阳性,TTF-1在非小细胞肺癌（NSCLCs)阳性表达强度与病人的预后成呈负相关，可作为一项独立的预后指标，肺的典型性类癌(TCS)均为阴性，表明小细胞肺癌和非小细胞肺癌可能有一个不同于TCS的共同起源的理论。

MLH1(+)、MSH2(+)PMS2(+)、MSH6(+)，即微卫星稳定型大肠癌，提示适合于含氟尿嘧啶类药物的化疗方案，并且分化差是高危因素之一。

免疫组化和特殊染色是病理检查中常用的检测方法，免疫组化全称是免疫组织化学染色，病理检查中最常用的是HE染色，使用非HE染色的检测方法都可以称为特殊染色。都是病理检查中对送检组织进行的处理方法，组织经过一系列的处理之后才能在显微镜下观察其有无病变，病变是什么等。

扩展资料：

免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

参考资料来源：

做病理要做免疫组化和特殊染色是什么意思

上面都是病理切片免疫组化染色的结果。结果显示组织中的上皮细胞阴性（ck-),淋巴细胞阳性（LCA+).这些染色只表明这些细胞的来源是淋巴，但不显示良恶性。所以正常的淋巴细胞浸润（喉咙里是有的）还是淋巴瘤都可以有这些表现，不能够通过这个区分的。