无外泌体血清培养基制备方法 外泌体细胞共培养

培养基的配制方法 培养基的配制方法是什么

1、配制用水

无外泌体血清培养基制备方法 外泌体细胞共培养

培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的

双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。

2、培养基

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

3、血清

培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。

4、抗菌素

为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。

5、植物血凝素（PHA）

非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。

经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。

PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均

被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。

50ml完全培养基的配制比例

50ml完全培养基的配制比例50/1050。

基础培养基添加血清、抗生素等物质后，叫完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。基础培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需添加天然培养基，常用的是牛血清，因为牛血清中含有促细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质。

培养基

由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。

血液培养基怎么做？

血液培养基是一种用于细菌、真菌、等微生物的培养和繁殖的培养基。血液培养基是微生物学研究中常用的一种培养基，特别是在临床实验室中，广泛用于细菌、真菌、等微生物的诊断和鉴定。

血液培养基的制备需要按照一定的配方和标准作程序进行，以确保培养基的质量和稳定性。本文将介绍血液培养基的配方和制备方法，以供参考。

一、血液培养基配方

1. 酪蛋白胨肉汤（tryptic soy broth，TSB）

酪蛋白胨肉汤是一种常用的培养基，适用于多种菌种的培养和繁殖。其配方如下：

成分 每升（g）

酪蛋白胨（casein peptone） 15

酵母浸膏（yeast extract） 5

氯化钠（sodium chloride） 5

水 1000

2. 大肠杆菌培养基（Luria-Bertani broth，LB）

大肠杆菌培养基是一种适用于大肠杆菌等革兰氏阴性菌的培养基。其配方如下：

成分 每升（g）

酵母提取物（yeast extract） 5

酪蛋白胨（tryptone） 10

氯化钠（sodium chloride） 10

水 1000

3. 营养琼脂培养基（nutrient agar，NA）

营养琼脂培养基是一种适用于多种菌种的固体培养基。其配方如下：

成分 每升（g）

肉汤膏（beef extract） 3

酵母提取物（yeast extract） 5

琼脂（agar） 15

水 1000

4. 脑心素肉汤（brain heart infusion，BHI）

脑心素肉汤是一种适用于多种菌种的培养基，尤其适用于接种困难的菌种。其配方如下：

成分 每升（g）

肉汤膏（beef extract） 10

脑心素（brain-heart infusion） 12.5

氯化钠（sodium chloride） 5

水 1000

5. 洛阳液（Luria broth，LB）

洛阳液是一种适用于大肠杆菌等革兰氏阴性菌的培养基。其配方如下：

成分 每升（g）

酵母提取物（yeast extract） 10

酪蛋白胨（tryptone） 10

氯化钠（sodium chloride） 10

水 1000

二、血液培养基制备方法

1. 酪蛋白胨肉汤（TSB）的制备方法：

（1）将15g酪蛋白胨、5g酵母浸膏、5g氯化钠加入1000ml蒸馏水中，加热至沸腾。

（2）将培养基调节至pH7.2±0.2。

（3）分装到无菌中，灭菌后储存在4℃。

2. 大肠杆菌培养基（LB）的制备方法：

（1）将5g酵母提取物、10g酪蛋白胨、10g氯化钠加入1000ml蒸馏水中，加热至沸腾。

（2）将培养基调节至pH7.0±0.2。

（3）分装到无菌中，灭菌后储存在4℃。

3. 营养琼脂培养基（NA）的制备方法：

（1）将3g肉汤膏、5g酵母提取物、15g琼脂加入1000ml蒸馏水中，加热至琼脂溶解。

（2）将培养基调节至pH7.2±0.2。

（3）分装到无菌培养皿中，灭菌后储存在4℃。

4. 脑心素肉汤（BHI）的制备方法：

（1）将10g肉汤膏、12.5g脑心素、5g氯化钠加入1000ml蒸馏水中，加热至沸腾。

（2）将培养基调节至pH7.4±0.2。

（3）分装到无菌中，灭菌后储存在4℃。

5. 洛阳液（LB）的制备方法：

（1）将10g酵母提取物、10g酪蛋白胨、10g氯化钠加入1000ml蒸馏水中，加热至沸腾。

（2）将培养基调节至pH7.0±0.2。

（3）分装到无菌中，灭菌后储存在4℃。

三、注意事项

1. 所有培养基的制备过程中应注意无菌作，避免细菌、真菌等污染。

2. 每次制备培养基前，应先用对应配制出基础培养液，再通过调节pH值和加入琼脂等方法制成固体培养基。

3. 制备过程中，应注意温度和时间，避免过高的温度或过长的时间对培养基成分的破坏。同时，也应注意培养基的储存条件，避免高温或阳光直射等因素对培养基的影响。

4. 不同的微生物菌种对不同的培养基有不同的适应性，应根据不同的菌种选择适当的培养基进行培养。

总之，血液培养基是微生物学研究中常用的一种培养基，其配方和制备方法对细菌、真菌、等微生物的培养和繁殖具有重要的意义。在制备过程中，应注意无菌作和温度控制等因素，以确保培养基的质量和稳定性。

无血清培养基的添加组分

1.促贴壁物质：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等 。

transwell实验原理

transwell实验原理：

细胞迁移是肿瘤转移的一个重要指标，Transwell小室可研究肿瘤细胞的迁移能力。小室底层有一张通透性聚膜，上室为无血清培养基，下室为含10%胎牛血清培养基，细胞对血清中的细胞因子等具有趋向性，利用这种趋向性促使细胞向含血清的下室转移，不同细胞会显示不同的运动转移能力。

实验步骤：

1、消化细胞，制备无血清细胞悬浮液，计数，加入细胞悬液100ul，接种细胞105/孔。

2、24孔板（下室）加入600ul含10%胎牛血清培养基，将小室置于24孔板中，上室加100ul无血清培养基悬浮的细胞。

3、37℃培养一段时间（24h、36h、48h，若48小时后仅转移零星细胞，不建议做转移实验。）

4、倒扣小室于吸水纸上，弃去小室内部培养基，用PBS冲洗小室

5、小室置于4%（（24孔板，1ml））中，固定15-20min，PBS冲洗小室

6、小室置于结晶紫染液（24孔板，1ml）中，染色15min，PBS冲洗小室

7、用棉拭子轻轻擦去小室内部非转移细胞，空气晾干

培养基制备的基本过程是什么?

培养基制备的基本过程如下：

(1)调配成分按培养基组成准确称取各成分用量，加一定量蒸馏水使其充分混合：

(2)溶解将调配好经沸水浴使其完全溶解。

(3)将pH调至适宜值，一般是7.2～7.6。

(4)滤过澄清自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。

(5)分装按制备目的将培养基分装于不同的容器内，如、三角瓶等。

(6)灭菌根据培养基成分的性质，选择合适的温度及方法进行灭菌。由耐热物质配制成的培养基常以103.43kPa灭菌15～20分钟；含糖培养基以68.95kPa灭菌lO～15分钟；富含蛋白质的培养基需用血清凝固器灭菌。

(7)质量检验培养基制备后需进行无菌试验和效果试验以检查是否合格。

(8)保存制备好的培养基应注明名称、制作日期，存放在冷暗处或4℃冰箱里。