色谱柱的分类与选择 色谱质谱联用仪

色谱柱的区别有哪些？

b ：此类填料为非键合相

一、固定相不同

色谱柱的分类与选择 色谱质谱联用仪

色谱柱的分类与选择 色谱质谱联用仪

B、大环抗生素型：

极谱柱：聚乙二醇—TPA改性；聚乙二醇—20M。

b、正相方法

三、应用不同

非极谱柱：碳氢化合物；氨基酸、基油；多核芳烃、酚、酯、碳氢化合物、物、醇；物、醇、酯、硝基化合物。

极谱柱：酸、醇、醛、酯、腈、酮、基油；六六六、DDT等八种含氯农拟除虫菊酯类、含磷类农。

影响色谱柱性能因素有：

一、物理因素：

1、硅胶纯度：硅胶纯度和残留金属离子浓度，硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。

3、 颗粒形状及粒径球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀，不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，容易谱带展宽；平均颗粒直径，粒径越小，柱效越高，柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低，压力越大。

5、 孔径：颗粒的孔或腔的平均尺寸，范围是80~300?，大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间，改善分离，所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子。

二、化学因素：

1、键合类型及键合相：键合相分子与基体单点相连为单体键合，这种键合方式可以提高传质速率，缩短柱平衡时间，；聚合体键合为键合相分子与基体多点相连，这种键合方式可以增加色谱柱稳定性，增加载样量。而键合相不同会直接影响化合物的保留行为。

2、碳覆盖率：高碳覆盖率可以提高分辨率和重现性，但分析时间长。

参考资料来源：

色谱法如何分类？

二、组成结构不同

1、常规的是按流动相的种类分离，流动相是气体是气相色谱，流动相是液体属于液相色谱；这两种再根据固定相的不同再次进行分离有气-固色谱、气-液色谱、液-液色谱、液-固色谱。

流动相为水或缓冲液

2、按作用原理分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱、以及亲和色谱。

3、按固定相的形状分类：薄层色谱、纸色谱、柱色谱、平板色谱。

毛细管电色谱，以毛细管为分离通道、以电渗流为驱动力的色谱

凝胶色谱，排阻色谱的另一种称呼。

色谱分为气相色谱（载气为气体，检测器有FID，TCD,NPD,FPD,ECD等）

液相色谱（载体（流动相）为液体，检测器有UV，DAD等）

薄层色谱（根据薄层原理色谱柱是色谱的心，色谱就是通过色谱柱内的填料对样品产生各种作用，达到分离的效果）

逆流色谱（根据萃取平衡法）

高效液相色谱中固定相分类?常用的是哪类?

4、其他种类色谱：超临界流色谱，以临界态的二氧化碳做1. 气相色谱法 (gas chromatography 简称 GC)用气体作流动相的色谱法。载体的色谱；

高效液相色谱中固定相可分为正向色谱和反向色谱

1 正相色谱法

采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相)

流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷）

常加入乙醇、、、等以调节组分的保留时间

常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）

2 反相色谱法

一般用非极性固定相（如C18、C8）

常加入甲醇、乙腈、、丙酮、等与水互溶的以调节保留时间

适用于分离由于此类固定相是由手性氨基酸—铜离子络合物键合到硅胶或聚合物上形成，因此流动相中必须含有铜离子以保证手性固定相上的铜离子不至流失。其它的过渡金属元素也已用于手性配位交换色谱，但铜离子应用广。形成络合物的过程十分缓慢，因此有时需提高柱温，温度约50℃。非极性和极性较弱的化合物

RPC在现代液相色谱中应用为广泛

据统计,它占整个HPLC应用的80%左右

TC色谱柱，HC色谱柱，RP色谱柱，C8色谱柱的不同

在柱色谱法中，首先选择一种适合的色谱柱，它通常是由玻璃或不锈钢制成的管状结构。柱内填充了一种固定相材料，称为填料或固定相。常见的填料有硅胶、氧化铝、分子筛等，根据需要也可以选择其他特定的填料。填料可以提供一定的分离效果，并与待分离物质发生吸附或分配作用。

选择色谱柱，重要的依据是待测物的性质，主要看其极性，还有待测物的沸点等。

反相NH2（氨基） -----------保留性弱；用于烃类；欠稳定液相柱90%用的是C18填料，还有C8。大多数中低极性有机物都可用C18柱子检测。

不同厂家柱子测定同一成分时保留时间、柱效都会有所异，总体来说，国外的如wate电化学检测器，电化学检测器是测量物质的电信号变化，对具有氧化还原性质的化合物，如含硝基、氨基等有机化合物及无机阴、阳离子等物质可采用电化学检测器。包括极谱、库仑、安培和电导检测器等。前三种统称为伏安检测器，用于具有氧化还原性质的化合物的检测，电导检测器主要用于离子检测。其中安培检测器应用较广泛，更以脉冲式安培检测器为常用。在两电极之间施加一恒定电位，当电活性组分经过电极表面时发生氧化还原反应（电极反应），电量（Q）的大小符合法拉第定律：Q=nFN。rs、菲罗门、迪马、安捷伦等柱子要比国内的柱效高，耐用。

建立分析方法时，要对色谱柱进行筛选，一般就是选择3到4根不同厂家的同一类色谱对同一成分同一色谱条件进行检测，将柱效、分离度、拖尾因子、不对称度等作为评价指标。

常用的色谱仪器有哪两大类，各自有何特点

4、 颗粒表面积：颗粒外表面和内部孔表面的总和，以m2/g表示，相对而言高表面积对样品具有较强的保留能力，更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态，更适合梯度洗脱程序。

1、面积归一化法优点是简便、准确，当作条件变化时对结果影响较小，宜于分析多组分试常见色谱柱中的填料分类样中各组分的含量。但是试样中所有组分必须全部出峰，因此，此法在使用中受到一定限制。

2、外标法是用纯物质配成一系列不同浓度的标准溶液（或直接购买不同浓度标准溶液）分别取一定体积，注入色谱仪，根据峰面积和浓度做标准曲线。在分析未知样时按与标准曲线相同的作条件和方法，由标准曲线查出所需组分的浓度（现在在工作站上直接就能求出浓度）。此法要求进样准确，作条件稳定，分析样品和标准曲线条件必须一致。

3、内标法是试样中所有组分不能全部出峰或只要求测定试样中某个或某几个组分时，可采用此法。内标法是在准确称取一定量的试样中，加入一定的标准物质（内标物），根据内标物和试样的质量以及色谱图上的相应峰面积，计算待测组分的含量。内标法的关键是选择合适的内标物，内标物应是试样中不存在的纯物质，物质与被测物质相近，能溶于样品中，但不能于样品发生反应。此法比较费事，一般不使用又称凝胶色谱法 （gel chromatography ）,于快速分析。

高效液相色谱分类

极谱柱：通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺。。基团，如（NH2，随着流动相的流动，分离出的组分按顺序从柱中洗脱出来。，通过检测器对洗脱的组分进行监测和记录，可以得到各组分的相对含量和纯度信息。常用的检测器包括紫外-可见吸收检测器、荧光检测器、质谱检测器等。APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

色谱仪一般有哪些分类？

离子色谱是高效液相色谱（三）按固定相的形式的一种，是分析阴阳离子的一种液相色谱方法，该方法具有选择性好、灵敏、快速、简便等优点，并且可以同时测定多种组分。高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography简称HPLC）又称高速或 高压液相色谱。该方法是吸收了普通液相层析和气相色谱的优点，经过适当改进发展起来的。它既有普通液相层析的功能（可在常温下分离制备水溶性的物质），又有气相色谱的特点（即高压，高速，高分辨率和高灵敏度）；它不仅适应于很多不易挥发，难热分解物质的定性和定量分析，而且也适用于上述物质的制备和非极谱柱：常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官万古霉素分子量为1449，结构中存在18个手性中心，3个环。万古霉素具有“篮状”结构，它的附近还有一个可弯曲的糖平面，可将分析物分子包埋在“篮子”中。羧基和仲氨基分布在“篮子”的边缘，参与和分析物分子产生离子作用。万古霉素手谱柱可用于反相模式、正相模式和极性模式。万古霉素手谱柱可以分离胺类、中性酰胺、脂类。但对于酸性化合物选择性较低。在反相模式中，有机相常用、乙腈和甲醇。水相常用-乙酸缓冲液。色谱柱适用的pH范围为4-7。通常优化碱性化合物手性分离条件时，选择pH=7为起点比较好。另外、乙腈有的选择性。有时采用纯的甲醇和乙醇作流动相也可达到好的分离效果。万古霉素手谱柱也可用正相模式，采用/乙醇为流动相。能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等。分离。

色谱柱是什么?

硅胶b ------色谱柱是分离用的，没有色谱柱就不能进行分离、定性、定量了，色谱柱是根据柱子里的填充物不同来区别的，填充物又是根据需要分离的物质的极性来选择的------普适性好；价廉；作欠方便；用于制备LC

1906年俄国植物学家M.Tsweet将碳酸钙放在直立玻璃管中，从顶端倒入植物色素的提取液，然后用冲洗，不同颜色的色素在管中迁移速率不同，形成不同颜色的色带，因而这种分离方法被命名为色谱法 英文名称chromatography。

以后随着这种技术的不断发展，色谱法已大量用于无色物质的分离，色谱已现在色谱种类繁多，柱色谱中装固定相的容器可以叫色谱柱，色谱柱也不仅仅局限于玻璃管了，也有没有固定相的毛细管色谱柱经失去原来的含义，但色谱法名称却一直沿用下来

色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。

色谱法的分类有哪些？

而色谱柱种类很多，反正就是对样品离得组分保留能力不同来分离样品。

色谱法有多种类型，从不同角度出发，有各种分类法。

(2)按固定相使用的形式，可分为柱色谱法(固定相装在色谱柱中)、纸色谱法(滤纸为固定相)和薄层色谱法(将吸附剂粉末制成薄层作固定相)等。

(3)按分NH2（氨基） -----------极性大，欠稳定离过程的机制,可分为吸硅烷化硅胶 -----------吸附性弱，溶剂兼容性好；适用于附色谱法(利用吸附剂表面对不同组分的物理吸附性能的异进行分离)、分配色谱法(利用不同组分在两相中有不同的分配系数来进行分离)、离子交换色谱法(利用离子交换原理)和排阻色谱法(利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用)等。

如何有效选择高效液相色谱柱

①甲过程表示ATP的水解，则反应物有ATP和水，故①错误； ②AMP是一磷酸腺苷，可参与AMP+Pi+能量→ADP，又是腺嘌呤核糖核苷酸，是合成mRNA的原料，故②正确； ③光能在光合作用的光反应中可转化为ATP中的能量，细胞呼吸中有机物分解释放出的能量，也可合成ATP，但热能无法用于合成ATP，故③错误； ④酶具有专一性，催化乙过程和丙过程的酶不是同一种酶，故④正确； ⑤ATP中T表示三个，ADP中D表示两个，则AMP中M表示“一个”，故⑤正确； ⑥根据AMP中A表示腺嘌呤核苷，则UMP中的U指尿嘧啶核苷，故⑥错误； ⑦HIV的遗传物质是RNA，单体为AMP、UMP、CMP、GMP，故⑦正确．故选：A．

使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。

Tsweet实验中德玻璃管被称为色谱柱（column） ，管中填充的碳酸钙色谱分析常用的定量方法：归一化法、内标法和内加（增量）内标法、外标法。称为固定相。