细胞转染实验结果分析_细胞转染实验结果分析与讨论

THP-1细胞转染

你做转染前的细胞状态如何？细胞的状态是整个转染实验的重要因素，免疫细胞的确很难转染。其次才是转染方法，THP-1细胞我们实验室没有做过，我们实验室做的HL60细胞转染，用的其他实验室同学的的BIODAI，细胞的铺板密度一般在45%左右 转染后飘起来的细胞也不多

细胞转染实验结果分析_细胞转染实验结果分析与讨论

thp1细胞可以分泌哪些细胞因子

细胞因子（cytokine,CK）是一类能在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽.

细胞因子是免疫细胞产生的一大类能在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽.化学性质大都为糖蛋白.免疫球蛋白、补体不包括在细胞因子之列.

趋化因子(chemokines)：是指具有吸引白细胞移行到感染部位的一些低分子量趋化因子(多为8-10KD)的蛋白质(如IL-8、MCP-1等),在炎症反应中具有重要作用.

数次实验总结：影响DNA/RNA转染效率的6大因素

1.启动子的选择

启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。

2.质粒的大小和质量

线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分，使得DNA形成转染复合物时更致密一些，更容易转染一些。纯化质粒的质量也会影响转染效率，一定要选择高质量的质粒。

3.质粒DNA的浓度和量

既然质粒纯化已经不成问题，初学者通常都不会在乎甚至愿意多加点DNA，但是要注意的是，DNA量过少固然转染效率不高，DNA量过多同样会降低转染效率。所以预实验需要按照说明书的要求，按一定比例混合适量的质粒DNA和转染试剂。有的转染试剂要求DNA的量多些，有的转染试剂效率高只要很少DNA。

1.转染试剂

转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。

2.RNA转染时RNA的用量

RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA和转染试剂的比例决定了转染复合物的结构和净电荷，以及是否容易被细胞膜吸附和内吞。RNA少了固然表达不好，太多也会有毒性的问题。

3.RNA本身的长度结构

除了作，RNA本身的长度结构也对转染有一定的影响。长度过长容易断链，哺乳动物的mRNA分子带有5’端帽子结构和3’端PolyA尾巴，此外还有成为IRES(internalribosomal entrysite)的核糖体结合区，这些结构或者有助于提高mRNA的稳定性，或者有助于核糖体结合到mRNA上进行翻译。

细胞转染后观察荧光结果

细胞转染后观察荧光结果:

1）转染细胞状态一定要好，这是成败的关键。我选择的是早晨消化COS，分瓶密度高，下午即在60%满时，就转染1-2ugDNA，6hr换液用低血清（1%FBS）DMEM维持

2）GFP-目的蛋白由于CMV启动子问题，表达效率太高，对细胞的正常状态不利，尤其是细胞状态不好的细胞。所以常有细胞漂浮起来、凋亡的现象，看荧光时，可以将细胞上清洗涤后观察。

3）根据不同蛋白的性质决定的，有的蛋白具有NES、NLS或跨膜区、信号肽等功能性序列，可能将GFP带到胞外

4）细胞的性质决定GFP位置：如COS细胞，常形成液泡，占据大量胞浆，GFP有时会沿着这种胞液分布，要选择高倍镜观察

5）观察要仔细，选择可见光和高倍数荧光看

怎么分析流式细胞仪检测转染发光sirna-cy3后的结果

准备单细胞悬液，不同的组织所用的酶是不同的。肝脏和脾脏肯定不一样。你查一下文献。如果没有现成的文献，建议多用几种不同的消化液多试几次。或者直接用机械分离然后过滤也可以。不需要抗体。你又不看抗原6663

细胞转染目的,转染成功证明什么?有什么意义

细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。

细胞转染技术有助于研究和控制真核细胞基因功能。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。

扩展资料：

转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种介导的转染技术。

理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。介导的转染技术，是目前转染效率的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。

需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的作细节，都需要考虑。

参考资料：百度百科-细胞转染

细胞转染目的,转染成功证明什么?有什么意义

转染一般是将目的基因构建到某个载体,将构建好的重组质粒导入细胞中,这样就能表达你所要的目的蛋白用于后续实验.转染可以得到细胞中本身不表达的蛋白或是能提高某些蛋白表达量.