索莱宝：细胞冻存液的作用及成分

求细胞冻存液的主要作用及成分。越全越好。。

细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃。索莱宝细胞冻存常用冻存液的成分如下：20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培养液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止细胞内冰晶形成。将DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占总体积的10%，然后滤膜过滤后分装保存备用。

索莱宝：细胞冻存液的作用及成分

细胞冻存液的作用是将活细胞冻存后，长期保存。

一般配置冻存液有两种配方

培养基，血清，DMSO配比为7：2：1 血清，DMSO配比为9：1

细胞冻存液怎么配

细胞冻存液制作步骤：

1、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液。

2、取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

3、去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来。

4、离心1000rpm，5min。去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液。

5、用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的终密度为5×106/ml～1×107/ml。

6、将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml。

7、在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及作者。

8、冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃到 -10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。

参考资料来源：

细胞冻存液的配置成分及比例：

细胞冻存液是含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液。在冻存前一天换一次培养液。

配置方法：

1、将DMSO和小牛血清加入培养液中，各自含量占总体积的10%；

2、然后用滤膜过滤配置好的细胞冻存液；

3、用专用保存瓶分装保存备用即可。

扩展资料：

细胞冻存液中的配制注意事项：

1.DMSO不用高压灭菌;DMEM不能高温高压灭菌，可以过滤除菌。

2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。

3.DMSO是含10%FBS的DMEM=1:9(体积比)。

4.取用冻存液均要在超净工作台内无菌作。

5.初次使用融化后可在2-8℃避光保存至少1个月，少量蛋白析出不影响冻存效果。

6.冻存时从室温可快速降到0℃，再降温时一般按每分钟降温1～2℃，待降至-70℃以下时可放入液氮中，在液氮中细胞可保存数年或更长时间。

参考资料：

细胞冻存

1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷；

2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞（尽可能温和）；

3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.

4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.

5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐）；或者可以在4℃,2h；然后转到-20℃,2h；-80℃,2h；放入液氮罐.

这是我实验中用的protocol,

求细胞冻存液的主要作用及成分。越全越好。。

细胞冻存液的作用是将活细胞冻存后，长期保存。

一般配置冻存液有两种配方

1.

培养基，血清，DMSO配比为7：2：1

2.

血清，DMSO配比为9：1

我的细胞培养不用血清，冻存要怎么样

细胞培养不用血清，冻存可以用无血清冻存液

配方为细胞条件无血清培养基与含10%亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀

冻存过程：

消化贴壁细胞或收集悬浮细胞，将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟，弃上清液

用一定量冻存液将细胞重悬，计数并调整细胞密度至100个每毫升左右

将细胞悬液分装至2ml冻存管中，每管1ml并将冻存管口封，贴上标签做好记录

降温： 4度1小时，负20度1小时，负80度18小时或隔夜，液氮

原代细胞冻存基本技术哪位能介绍一下啊

原代细胞冻存基本技术 1、选用原代细胞生长状态好(90-95%)，生长数量大于5×105进行冻存。 2、原代细胞冻存24小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。 3、贴壁的原代细胞需常规用0.25%胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。 4、细胞离心管在1000rpm下离心5分钟，小心弃清液。 5、将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至5×105/ml。 6、将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。 标明细胞种类和冻存日期。 请记住：封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。 请按下列顺序降温保存原代细胞：室温→4℃(20 分钟)→ 冰箱冷冻室(30 分钟)→ 超低温冰箱(-80℃过夜)→ 液氮。 原代细胞冻存液常用配方：70%完全原代细胞培养液(不含有血清、添加剂、双抗)+ 20%胎牛血清 + 10%DMSO 只是简单的介绍了一下，更详细的介绍可以到生物帮那里了解啊，希望我的回答可以帮到你 有空的话可以去

需要的冻存细胞,可以直接放进液氮吗?

不可以 把细胞消化下来放到冻存液里面 用冻存管装 先用冻存盒放-80过夜 再放液氮

冻存液配方 DMEM 60% FBS 30% DMSO 10% 可根据细胞种类调整DMEM和FBS比例

细胞的冻存和复苏一般是遵守“慢冻快融”。常规的慢冻方法是：

1.先将冻存管放入4℃冰箱，约40min。

2.接着置于-20℃冰箱，约30～60min。

3.置于-80℃超低温冰箱中放置过夜。

4.置于液氮罐中长期保存。

ES培养基成分

胚胎干细胞（embryonic stem)不同的ES配方多少有些异。

基础培养基一般用DMEM或DF12。

15%~20%的FBS或KSR。

LIF，2-ME。

举例：简单的：85%DF12+15KSR+LIF